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EXclone载体构建体系

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    EXclone Kit是一款媲美Gateway体系的轻便高效的克隆试剂盒,无需酶切,一个系统,一步回响反映便可实现: 1)将PCR片断快速定向克隆到恣意EXclone载体;2)将目标片断从入门载体曲接转移到恣意目的载体。 EXclone体系供应壮大的EXclone载体库,只需供应目的DNA片断或入门载体, 便可经由过程一步回响反映曲接转移到恣意EXclone载体,制止反复测序,一次克隆,处理一切。EXclone体系包罗2个回响反映, 详细信息请参考EXclone说明书(PDF)

    ---EXIN回响反映:将PCR片断一步克隆到包孕入门载体pEXIN在内的恣意EXclone载体

    ---EXTO回响反映:将入门载体pEXIN中的目的片断一步克隆到所需的恣意EXclone载体

------- 最先运用 -------
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EXclone特性

--浅易 无需酶切,一管混淆, 一步回响反映
--轻易 可将入门载体中的目的片断经由过程一步回响反映曲接转移到恣意EXclone载体,制止反复测序,一次克隆,处理一切
--快速 37oC回响反映30~60分钟便可
--高效 1000个以上的菌落数,>90%以上的阳性率,供应您所需的克隆
--天真 同时用于入门克隆和亚克隆,兼容仄末尾和粘性末尾
--集成 壮大的EXclone载体库(涵盖适用于大肠杆菌、酵母、虫豸、动物、哺乳动物细胞等宿主的目标载体),只需供应克隆片断或入门克隆,便可高效快速构建恣意EXclone载体,削减毛病的发生

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Step 1. 设想带有16-bp末尾的引物,PCR扩增目的片断并纯化

Forward Primer: 5- TCAGCAGTCGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides)
Reverse Primer:   5- TTAGCGTGTGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides)

Step 2. 从EXclone载体库挑选您要的入门载体或目的载体

Step 3. 竖立EXIN回响反映系统

5X EX-Buffer2 µl
EX-Vector2 µl
EXclonase Enzyme 1 µl
Your Insert DNA X*
H2O add to 10 µl

*0.1-50 ng PCR片断

Step 4. 将回响反映系统混淆后置于37oC孵育30分钟,然后于室温(20oC)继承安排15分钟

Step 5. 与5 µl回响反映液,参考尺度步调转化大肠杆菌

EXTO回响反映--将目的片断从入门载体一步转移到恣意EXclone目的载体

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Step 1. 制备含有目标片断的pEXIN质粒,发起稀释至10ng/µl

Step 2. 从EXclone载体库挑选您的目的载体

Step 3. 竖立EXTO回响反映系统

5X EX-Buffer 2 µl
EX-Vector 2 µl
EXclonase Enzyme 1 µl
pEXIN-Insert Donor plasmid X*
H2O add to 10 µl

        *0.1-20 ng 含有目的片断的入门载体质粒

Step 4. 将回响反映系统混淆后置于37oC孵育60分钟,然后于室温(20oC)继承安排15分钟

Step 5. 与5 µl回响反映液,参考尺度步调转化大肠杆菌

 

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