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百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒

一步载体构建,间接遗传转化,数百次的胜利实行考证

百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒可以或许将gRNA靶点序列,经由过程一步回响反映,快速高效天构建至Cas9/gRNA质粒中, 构建的质粒可以或许间接用于动物遗传转化。该载体的Cas9卵白经密码子优化革新,接纳拟南芥、大豆、水稻等动物的U6启动子表达gRNA序列。 数百次的遗传转化实行注解,百格CRISPR/Cas载体皆可以或许异常高效的动物的基因敲除和编纂。

K7

--轻便 无需酶切,一步载体构建,间接用于遗传转化
--快速 20oC回响反映30~60分钟便可
--高效 1000个以上的菌落数,95%以上的阳性率,供应您所需的克隆
--牢靠 数百次的动物遗传转化实行,90%以上基因敲除成功率
--普遍 涵盖拟南芥、油菜、水稻、小麦和大豆等

产物构成

Package
Buffer Anneal
Vector-BGK-X
Enzyme Mix
10T
300 µl
20 µl
10 µl
百格CRISPR/Cas载体

CRISPR/Cas载体BGK01

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  • 接纳拟南芥U6启动子,可以或许高效的用于双子叶植物,特别是拟南芥
  • 接纳加强型CaMV启动子,高效表达Cas9卵白
  • CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
  • 100屡次拟南芥基因敲除实行考证

CRISPR/Cas载体BGK015-K7

  • 接纳拟南芥U6启动子,可以或许高效的用于双子叶植物,特别是拟南芥
  • 接纳加强型CaMV启动子,高效表达Cas9卵白
  • CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
  • 100屡次拟南芥基因敲除实行考证

CRISPR/Cas载体BGK03

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  • 接纳水稻U6启动子,可以或许高效的用于单子叶植物,特别是水稻
  • 接纳加强型玉米UBI启动子,高效表达Cas9卵白
  • CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
  • 300屡次水稻基因敲除实行考证

CRISPR/Cas载体BGK041

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  • 接纳大豆U6启动子,可以或许高效的用于双子叶植物,特别是大豆
  • 接纳加强型CaMV启动子,高效表达Cas9卵白
  • CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
  • 数十次大豆基因敲除实行考证
运用步调

STEP 1. 设想并天生gRNA靶点序列。辨认序列一样平常挑选19bp,比方挑选靶点序列CCCCTCGGACCTCTCCTCCAGG (赤色AGG为PAM序列),则该靶点序列为CCCCTCGGACCTCTCCTCC。将19-bp靶点序列输入上面对话框,百格会为您主动天生取试剂盒对应的Oligo序列, 您只要间接分解便可。

请输入19-bp靶点序列 挑选载体天生Oligo 序列 (5'-3')


UP:
LOW:
构建后的载体上下流DNA序列 5’-3’(可用于测序序列比对)
 

STEP 2. 制备Oligo二聚体。将分解的Oligo加水消融至10 µM,按以下回响反映系统混淆后,95oC加热3分钟, 然后以约0.2oC/秒迟缓降至20oC (推荐接纳PCR仪)。

Buffer Anneal
UP Oligo
Low Oligo
H2O
18 µl
1 µl
1 µl
Add to 20 µl

STEP 3. 将Oligo二聚体构建至CRISPR/Cas载体。按以下回响反映系统正在冰上混淆各个组分, 混匀后室温(20oC)回响反映1小时。

CRISPR/Cas Vector
Oligo 二聚体
Enzyme Mix
H2O
2 µl
1 µl
1 µl
Add to 10 µl

STEP 4. 参考尺度步调转化大肠杆菌。

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